肝素酶I在臨床一線抗凝藥低分子肝素的制備以及一些診斷分析中具有重要應(yīng)用。本成果鑒定發(fā)現(xiàn)了腸道菌（多形擬桿菌）來(lái)源的肝素酶I，并結(jié)合AI分析對(duì)其進(jìn)行了進(jìn)一步的理性進(jìn)化，獲得了多個(gè)比目前產(chǎn)業(yè)化所用黃桿菌來(lái)源的肝素酶具有更高的活性和更強(qiáng)的穩(wěn)定性的酶分子，并建立了其高效可溶性基因工程表達(dá)工藝。目前，已獲得了3件授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利。

與傳統(tǒng)肝素相比，低分子肝素具有更強(qiáng)的抗凝活性，但又很大程度地減小了出血的危險(xiǎn)性，因此被廣泛應(yīng)用于臨床抗凝治療中。目前，低分子肝素的制備主要是通過(guò)化學(xué)法，但存在環(huán)保風(fēng)險(xiǎn)大、產(chǎn)物活性易受影響等缺點(diǎn)。生物酶解法可以很好的克服這些問(wèn)題。目前市場(chǎng)所用肝素酶主要源自肝素黃桿菌（Pedobacter heparinus），通過(guò)基因工程方法生產(chǎn)，但其產(chǎn)量、酶活及穩(wěn)定性均不甚理想，因此嚴(yán)重限制了酶法制備在低分子肝素生產(chǎn)中的應(yīng)用（目前主要是亭扎肝素等品種使用酶解法）。

在國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、863等項(xiàng)目支持下，本研究通過(guò)基因工程技術(shù)，在人體腸道有益菌——多形擬桿菌（Bacteroides thetaiotaomicron）中鑒定并克隆了與肝素黃桿菌肝素酶具有較高同源性的新的肝素酶I基因（Bt-HepI），構(gòu)建了其重組大腸桿菌生產(chǎn)菌株，確定了酶學(xué)性質(zhì)，證實(shí)該肝素酶具有和工業(yè)所用肝素黃桿菌肝素酶I（Ph-HepI）相同的催化活性，但可溶性表達(dá)特性則顯著優(yōu)于Ph-HepI，比酶活是pH-HepI的2.05倍。在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步結(jié)合AI工具、應(yīng)用分子動(dòng)力學(xué)模擬技術(shù)對(duì)構(gòu)效關(guān)系建議分析后，對(duì)酶分子進(jìn)行了理性分子改造，使重組酶的可溶性表達(dá)量和熱穩(wěn)定性均顯著提升（50℃半衰期進(jìn)一步提升到野生型Bt-HepI的2.14倍）。進(jìn)而，優(yōu)化確定了工程菌表達(dá)的最佳條件，5 L發(fā)酵罐的酶活產(chǎn)量可達(dá)3.94×105 IU/L。

本成果的產(chǎn)量、活性及穩(wěn)定性均高于目前工業(yè)用同類(lèi)產(chǎn)品，且來(lái)源安全可靠，將在抗凝藥物低分子肝素的制備、分析等領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。低分子肝素相關(guān)藥物的全球市場(chǎng)已超過(guò)130億美元,且繼續(xù)以年均10%左右的速度在增長(zhǎng)。因此，本成果將具有非常好的社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

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